A propos d'un essai de Phase I de thérapie génique effectué avec un plasmide contenant l'intégralité du gène dystrophine dans la Myopathie de Duchenne/Becker

About a Phase I gene therapy clinical trial with a full-length dystrophin gene-plasmid in Duchenne/Becker Muscular Dystrophy

¹ Institut de Myologie et Inserm U582, Bâtiment Babinski, Groupe Hospitalier Pitié-Salpêtrière, 75651 Paris Cedex 13
² Transgène S.A, 67000 Strasbourg
³ Département de Médecine Interne, Groupe Hospitalier Pitié-Salpêtrière, 75651 Paris Cedex 13

Auteur de correspondance : m.fardeau@myologie.chups.jussieu.fr

Reçu : 25 Janvier 2005

Résumé

Un premier essai de thérapie génique a été réalisé chez des patients atteints de myopathie de Duchenne/ Becker, à l'aide d'un plasmide contenant l'intégralité de la séquence codante du gène dystrophine. Cet essai de Phase I était destiné à apprécier le degré de transfection obtenue et à évaluer la tolérance au produit injecté ainsi qu'à l'expression du segment de dystrophine nouvellement synthétisé. Neuf patients ont été inclus dans l'essai, répartis en trois cohortes de trois. La première cohorte a reçu une injection intramusculaire dans les muscles radicaux de 200 g, la seconde une injection de 600 g, et la troisième deux injections à deux semaines d'intervalle de 600 g. L'inclusion des patients s'est faite de façon séquentielle, après examen des résultats du patient précédent par un comité de pilotage comprenant des experts indépendants. Le plasmide a été retrouvé dans les neuf prélèvements effectués trois semaines après la première (ou unique) injection. Une expression de la dystrophine exogène a été retrouvée chez 6 patients sur 9. Cette expression a toujours été faible, jusqu'à 6% de fibres présentant un marquage périphérique complet, et jusqu'à 26 % de fibres présentant un marquage partiel. Les messagers de la dystrophine ont été détectés par une RT-PCR “nichée” dans cinq des six prélèvements présentant des fibres marquées. Il est remarquable de noter qu'aucune réponse immunitaire humorale ou cellulaire vis-à-vis de la dystrophine exogène n'a été détectée. Aucune réaction secondaire locale ou générale n'a été observée. Ces résultats, modestes mais significatifs, ouvrent la voie à de nouveaux développements en terme de thérapie génique des maladies musculaires humaines, et en particulier dans les myopathies de Duchenne et de Becker.

Abstract

This is the first gene transfer trial in Duchenne/Becker patients. The aim of the study was to provide evidence on transgene expression and safety of the intramuscular administration of a plasmid containing a full-length dystrophin DNA. Nine Duchenne/Becker patients, distributed in three cohorts of three patients, were injected into their radialis muscles either once with 200 g (first cohort) or 600 g (second cohort) or twice, two weeks apart, with 600 g plasmidic DNA (third cohort). The patients were enrolled sequentially upon evaluation of the data by an independant pilot committee. In the biopsies taken three weeks after the initial injection from the injected site, the plasmid was detected in all patients. An exogenous dystrophin expression was found in 6/9 patients. The level of expression was low, up to 6% of weak complete sarcolemmal labelling, and up to 26 % of partial sarcolemmal staining. Dystrophin in RNAs were detected by nested RT-PCR in five out of the six biopsies with exogenous dystrophin- positive fibers. Interestingly, neither humoral or cellular antidystrophin responses were observed. No local or general adverse effects were seen. This paves the way for future developments in gene therapy in hereditary muscle diseases, and specifically in Duchenne/Becker myopathies.