Inhibition de la synthèse de la phosphatidyléthanolamine et du phosphatidylinositol, altération des phases G0 et G1 et apoptose spontanée chez les lymphocytes de sujets sous traitement immunosuppresseur

Inhibition of phosphatidylethanolamine and phosphatidylinositol synthesis, alteration of the G0 and G1 cell cycle phases and spontaneous apoptosis in lymphocytes from patients under immunosuppressive treatment

¹ Faculté de médecine Saint-Antoine, 27, rue Chaligny, 75012 Paris
² Unité de transplantation rénale et pancréatique, Groupe Hospitalier Pitié-Salpètrière, 83, boulevard de l'Hôpital, 75013 Paris

Reçu : 15 Septembre 2004

Résumé

Les lymphocytes de sujets traités par les corticoïdes et différents autres agents immunosuppresseurs ont été incubés 48 heures avec ou sans stimulation par la concanavaline A. La synthèse des phospholipides a alors été étudiée par l'incorporation du 32P-phosphate en pulses de 5 heures. On observe dans ces conditions que la synthèse de la phosphatidyléthanolamine est très diminuée sous l'effet du traitement immunosuppresseur. La synthèse du phosphatidylinositol diminue également, mais moins. Ces résultats dénotent une perte de sensibilité des lymphocytes à l'action du mitogène et une altération de la phase G0 et de la phase G1 tardive du cycle cellulaire. De façon parallèle (mais avec une incubation de 72 heures), les lymphocytes ont été étudiés par cytofluorimétrie en flux (fluorescence rouge à l'iodure de propidium). On voit alors, au cours de la stimulation, que le passage à la phase S est diminué de deux tiers chez les lymphocytes des sujets immunodéficients par rapport aux lymphocytes de sujets normaux, non traités. La population des lymphocytes en G0-G1, stimulés ou non par le mitogène, est elle-même fortement remaniée. Mais surtout, sous l'effet de l'incubation en milieu de culture, et mème en l'absence de toute stimulation par le mitogène, on observe, parmi les lymphocytes des sujets immunodéprimés, une forte proportion de lymphocytes apoptotiques, de 20 à 30 %. Cette tendance à une apoptose spontanée semble être inhérente à l'état d'immunodéficience en général. Elle est à rapporter à l'inhibition de la synthèse de la phosphatidyléthanolamine en phase G0.

Abstract

Lymphocytes from patients treated with immunosuppressive agents were cultured for 48 hours either with or without concanavalin A. Phospholipid synthesis was then studied using 32P pulse-incorporation (5- hours pulses). Phosphatidylethanolamine synthesis was strongly decreased under immunosuppressive treatment: 1.5-fold in resting lymphocytes and 3- to 4-fold in concanavalin A-stimulated lymphocytes. Phosphatidylinositol synthesis also decreased about 2-fold in stimulated lymphocytes. These results indicate a loss of sensitivity of immunodeficient lymphocytes to the mitogen and an alteration of the G0 and the late G1 cell cycle phases. In parallel, but after a 72-hours incubation, lymphocytes were analysed by flow-cytofluorimetry with propidium iodide. Under concanavalin A-triggered stimulation, the entry into the S phase was much lower in immunodeficient lymphocytes as compared to standard. The characteristics of the G0-G1 population of lymphocytes were also modified. More importantly, after incubation in the culture medium in the absence of mitogen, we observed, among the immunodeficient lymphocytes, a high level of apoptotic cells, about 20 to 30 %. This susceptibility to spontaneous apoptosis seems inherent to the status of immunodeficiency itself, whatever its origin. It may be related to the inhibition of phosphatidylethanolamine synthesis in the G0 phase.